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Effekt einer vorangegangenen Stimulation mit Lipopolysaccharid auf die Immunantwort bei septischer Peritonitis

Autor	Carolin Feterowski
Verlag	Verlag für Wissenschaft und Forschung
Erscheinungsjahr	2001
Seitenanzahl	121 Seiten
ISBN	9783897002968
Format	PDF
Kopierschutz	DRM
Geräte	PC/MAC/eReader/Tablet
Preis	19,90 EUR

Eine Immunstimulation mit LPS (Lipopolysaccharid) führt zu einer verbesserten Abwehr einer polymikrobiellen Sepsis. Trotz verminderter Sekretion pro-inglammatorischer Zytonine überleben mehr Mäuse die durch die CASP-OP (colon ascendens Stent pertonitis) induzierte Sepsis. Durch Akkumulation von neutrophilen Grammozyten, wichtiger Abwehrzellen des Immunsystems, am primären Entzündungsherd wird eine systemische Ausbreitung der Untestinalbakterien effektiv eingedämmt. Die Akkumulation ist keine Folge einer verstärkten Rekrutierung zum Entzündungsherd, sondern einer verzögerten Apoptose (prof. Zelltod) dieser Zellen. Die Adoptose wird durch lösliche Faktoren moduliert.

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Inhaltsverzeichnis

Inhaltsverzeichnis	4
1 Einleitung	8
1.1 Modelle zur Pathogenese der Sepsis	8
1.1.1 Schockmodell	8
1.1.2 Hyperinflammationsmodell	10
1.1.3 Immunsuppressionsmodell	12
1.2 Beitrag des angeborenen Immunsystems zur Infektabwehr	13
1.2.1 Pathogenerkennung durch Rezeptoren des angeborenen Immunsystems	13
1.2.2 Molekulare Mechanismen bei der Erkennung und Signalweiterleitung von LPS	15
1.2.3 Rekrutierung von Immunzellen zum Infektionsherd Beteiligung von Adhäsionsmolekülen	17
1.2.4 Apoptose Entdeckung einer zweiten Form des Zelltods: Apoptose	20
1.3 Fragestellung	23
2 Material und Methoden	24
2.1 Bezugsquellennachweis	24
2.1.1 Chemikalien	24
2.1.2 Filter, Filme	25
2.1.3 Radiochemilkalien	25
2.1.4 Reagenziensammlung („Kits“)	25
2.1.5 Geräte	26
2.1.6 Tiere	27
2.2 Medien und Puffer	27
2.2.1 Stammlösungen und Puffer	27
2.2.2 Medien und Reagenzien für die Zellkultur	28
2.3 Zellinien, Antikörper, Seren und Proteine	29
2.3.1 Zellinie	29
2.3.2 Antikörper Primärantikörper	29
2.4 Molekularbiologische Methoden	30
2.4.1 Präparation von RNS	30
2.4.2 Synthese radioaktivmarkierter „antisense“ RNS-Sonden für den Ribonuklease Protektion- Assay ( RPA)	30
2.4.3 Hybridisierung mit radioaktiv markierten RNS-Sonden	31
2.4.4 Elektrophoretische Auftrennung von RNS, Transfer und Detektion	31
2.5 Isolierung muriner Primärzellen	32
2.5.1 Präparation von murinen Peritonealmakrophagen und Peritonealinfiltratzellen	32
2.5.2 Gewinnung von Leukozyten aus peripherem Blut	33
2.5.3 Präparation von Knochenmarkszellen	33
2.6 Zellbiologische Methoden	33
2.6.1 Allgemeine Zellkulturtechniken	33
2.6.2 Stimulationsansätze muriner Peritonealmakrophagen	34
2.6.3 Chemotaxisassay	34
2.6.4 Migrationsassay	34
2.6.5 Durchflußzytometrische Analyse von Antigenen auf der Zelloberfläche (FACS Analyse)	35
2.6.6 Durchflußzytometrische Analyse der Selektin-Bindung	35
2.6.7 Analyse von reaktiven Sauerstoffradikalen ("oxidative Burst")	36
2.6.8 Bestimmung der Fähigkeit zur Phagozytose	36
2.6.9 Apoptoseassay	37
2.7 Bestimmung der Bakterienzahlen in peripheren Organen	37
2.8 Tierexperimente	37
2.8.1 Injektion	38
2.8.2 Colon ascendens stent peritonitis (CASP)	38
3 Ergebnisse	39
3.1 Auswirkung der Vorbehandlung mit LPS auf die Immunantwort isolierter Makrophagen	40
3.1.1 Sekretion pro-inflammatorischer Zytokine	40
3.1.2 Sekretion eines parakrinen Inhibitors der TNFa-Sekretion	42
3.2 Effekt des „primings“ mit LPS auf den Verlauf der durch CASP- OP induzierten septischen Peritonitis	44
3.2.1 Durch LPS-„priming“ vermittelter Schutz	44
3.2.2 Einfluß der „priming“-Dauer auf den Verlauf	45
3.3 Regulation von Zytokinen und Chemokinen nach CASP-OP	47
3.3.1 Auswirkung der Dauer des LPS-„primings“ auf den zirkulierenden Zytokingehalt	47
3.3.2 Durch CASP-OP induzierte Chemokinexpression in peripheren Organen	49
3.4 Bakterielle Belastung nach CASP-OP	51
3.4.1 Bakterienzahlen in peripheren Organen	51
3.4.2 Effektorleistung zirkulierender Granulozyten	52
3.5 Leukozyteninfiltrate am primären Infektionsherd	54
3.5.1 Auswirkung der LPS-Vorbehandlung vier Tage vor CASP-OP	54
3.5.2 Charakterisierung der Granulozyten	55
3.5.3 Wirkung der „priming“- Dauer	57
3.6 Rekrutierung von Granulozyten zum Infektionsherd	58
3.6.1 CASP-OP induzierte Chemokinproduktion	58
3.6.2 Pool an zirkulierenden Granulozyten	61
3.6.3 Charakterisierung der Leukozyten aus dem Knochenmark	62
3.6.4 Reaktion auf chemotaktische Reize und Migrationsvermögen von Granulozyten aus dem Knochenmark	63
3.7 Apoptose von Leukozyten/Neutrophilen	65
3.7.1 Apoptoserate infiltrierter Granulozyten	65
3.7.2 Einfluß von G-CSF auf die Apoptoserate von infiltrierten Granulozyten	67
3.7.3 Apoptoserate von Knochenmarksleukozyten	69
3.7.4 Wirkung der Peritonealfüssigkeit auf die Apoptoserate	70
3.7.5 Untersuchung der Peritonealfüssigkeit	73
3.7.6 Modulation der Apoptoserate von Peritonealgranulozyten	76
4 Diskussion	78
4.1 Wirkung der LPS-Vorbehandlung auf die Zytokinsekretion	79
4.1.1 Modulation von Makrophagen	79
4.1.2 Wirkung während einer Infektion Systemische Zytokinsekretion	82
4.2 Immunstimulation („priming“) und Infektabwehr	87
4.3 Rekrutierung von Granulozyten zum Infektionsherd	90
4.4 Apoptose als regulierender Mechanismus bei der Infektabwehr	93
4.5 Ausblick	98
5 Zusammenfassung	100
6 Abkürzungsverzeichnis	102
7 Literaturverzeichnis	104
Danksagung	117

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